Virološki študije. Črevesnih bolezni. (Del 4)

Uporaba RKOA vzporedno z IFA in RAL pokazala tesna povezava metode, ki se uporabljajo rezultate (Zhang Y. et al., 1989- Pereira V. et al., 1992- Jap K. s sod., 1992). Vendar pa informacije o pojavu nespecifičnih reakcij kopromaterialami, ki jih lahko odstranimo z adsorpcijo predhodno suspenziji stafilokokov. Hkrati kljub sovpadanja rezultatov RKOA raziskava materialov in IFA, je bila njegova občutljivost in specifičnost nižja od ELISA in je primerljiva z aglutinacijo lateksa (Jap K. et al., 1992).

Tako rezultati RKOA omogočajo, da se priporočam za diagnozo rotavirusi v laboratorijih, kjer ne obstaja možnost, da na bolj občutljive in specifične metode. Vendar pa je pred kratkim testirali na spremembo RKOA in radioimunološki s proteinsko A Staphylococcus aureus je bistveno izboljšala občutljivost in specifičnost testa in študij imunološki odziv na VP2, VP6 in nsp2 v serumu in kopromaterialah otrok z okužbo RV (Colomina I. et al., 1998) .

Reakcija lateks aglutinacijski (RAL) se uporablja pri laboratorijski praksi zaradi prizadevanj v zadnjih letih tendenco za uporabo kot nosilci antigenov in protiteles inertne sintetičnih materialov. V ta namen uporabljajo polistirena kavčuka - sintetično velikosti kroglic delcev okoli 0,8 um. Manjši delci velikost (0,2-0,3 um) deponira v reakcijah počasno in ultratsentrifugatsii zahtevajo med kuhanjem Diag-stikuma, veliko vdolbino (> 1 mm) pogosto dobimo nespecifične reakcije. Latex delci, predhodno adsorbiranega protitelesa (antigen), pridobi sposobnost biti sprijete v prisotnosti homologna z antigenom (protitelesa) in vizualiziramo z specifično protitelo-antigen kompleksa. Za izboljšanje specifičnost in občutljivost delcev lateksa lahko občutljivi imunoglobulinov (Amer A. et al., 1990). Zaradi enostavnosti in hitrosti študije, kot tudi nizke stroške lateksa-aglutinacije, ki se uporablja v laboratorijski praksi precej širše: Ruggeri F. et al, 1992 ..

Trenutno urejeno proizvodnjo komercialnih testnih sistemov za lateks aglutinacije, ki je bila osnova za delo na primerjalno vrednotenje njihove diagnostične učinkovitosti.

Generalizirane Rezultati vrednotenja RLA in drugih laboratorijskih metod so ugotovili, da je občutljivost in specifičnost RLA primerjavi s TEM, ELISA, EF STRANI dovolj visoki in enako 70-96% in 80-100% saje-izvorni (Santos N. et al. , 1989- Molyneaux PJ et al., 1989- Amer A. et al., 1990- Hendricks MK et al., 1995). Uporaba monoklonskih protiteles še poveča diagnostično vrednost RLA (Dennehy R. et al., 1988- Zbinden R. et al., 1992- Sanchez R. et al., 1993).

Ob komercialni sistemi lateksa in raziskovalci uporabljajo laboratorijske teste, ki dajejo rezultate, primerljive z njimi (Amer A. et al., 1990-).

Ob istem času, so številni avtorji poudaril, da je uporaba RLA ni brez pomanjkljivosti, saj daje določeno število lažnih alarmov. Tako je pri pregledu 200 bolnikov otrok ELISA in Zaznali RLA 11 lozhnonegativnyh vzorce tečaji enako občutljivost in specifičnost 86 in 95%, v tem zaporedju (Amer A. et al., 1990). Kasneje, drugi avtorji v raziskavi 585 blata vzorcev bolnih otrok s RLA in EF STRANI prejela občutljivost in specifičnost 96 in 100%, oz. To je dalo 6 lažno negativen in lažno pozitiven rezultat na 3 V nasprotju z učinkom Faraday v nAAT. (Zbinden R. et al. 1992). Po Hendricks, MK et al. pregled 103 otrok v starosti od 1 meseca do 5 let TEM metode EF strani in RLA pokazala, da je občutljivost teh metod enak 84, 90 in 80% in specifičnosti 100, 100 in 81% oz. Avtorji so ugotovili 15% lažno pozitivnih rezultatov po RLA (Hendricks M. K. et al., 1995), ki je lahko povezan z rota-virusni gastroenteritis s krvjo v preiskovane snovi. V zvezi s tem je priprava pozitivnih reakcij v RLA z vzorci, ki vsebujejo kri, rezultati razlagati previdno in potrdili z drugimi metodami (Bendall R. et al., 1991).

Tako RLA predstavlja najbolj enostavnih diagnostičnih reakcijske odkrivanje rotavirusov. Kot koristen način za hitro diagnosticiranje in ima visoko stopnjo občutljivosti in specifičnosti te metode pa nima prednosti pred ELISA, TEM, EF PAGE, z izjemo hitrosti reakcije in ga je treba potrditi z drugimi metodami.

Če povzamemo materiale, je treba opozoriti, da je so testi na celi sedimentov pogosto uporablja v laboratorijski diagnostiki rotavirusi zaradi visoke občutljivosti in hitrosti pridobivanje rezultatov, enostavnost priprave in računovodstva, kot tudi pomanjkanje potrebe po uporabi prefinjeno opremo in dragih reagentov.

Diagnostične metode na osnovi odkrivanje virusa specifične RNA. Razvoj tehnike molekularne biologije v virologije privedel do izvajanja v praksi številnih novih diagnostičnih testov, ki temeljijo na odkrivanje virusne RNA. Njihova uporaba se je odprla možnost za pristop k molekularno epidemiologijo in pomagala rešiti nekatera vprašanja rotavirus taksonomije. Eden od prvih diagnostičnih testov iz te skupine je elektroforeza gel virusnega genoma.

Elektroforeza virusne RNA v poliakrilamidnem gelu z elektroforezo (PAGE EF), je dovolj prožna in se porazdeli tako pri raziskavah in praktičnih laboratoriji. Zaradi visoke specifičnosti in občutljivosti, je mogoče rešiti vrsto vprašanj, povezanih z rotavirusi, in najde uporabo v diagnozi, epidemiologije in preprečevanja. Možnost uporabe te metode je povzročila edinstveno vzorca porazdelitve v gelu enajstih virusni genom segmentov in visoko stabilnost rotavirusnim RNA z delovanjem okoljskih dejavnikov. Obstaja več različic EF STRANI. Nekoliko se razlikujejo drug od drugega, so vsi, ki temelji na ekstrakciji rotavirusa RNA, destilacijsko RNA s poliakrilamidno gelsko elektroforezo izoliramo pod vplivom električnega polja in vizualizacijo rezultatov destilacije RNA virusnem genomu. Spremembe so lahko na vsaki od teh faz EF STRANI. Tako lahko rotavirusom izolacije RNA se izvaja neposredno iz blata, mimo stopnjo proizvodnje očiščene virusa- možno predhodno ločitev eno- in dvoverižno RNA, 32P dajanje oznake, obdelavo materiala z nukleazo S1, uničuje enoverižne RNA razlikuje struktury- sestavek pufrskih raztopin, odstotek delitve in koncentriranje gelya- jakost toka elektroforeza, obarvanje metod. Čas študija je 24-36 ur. Kot rezultat so trakovi na gelu po obarvanju s srebro nitratov ali etidijev-bromo-house profilov ugotovili virusne RNA, ki ustreza 11 segmentov virusnega genoma (Unicomb L. E. et al., 1993- Assouli SM et al., 1995- Bos P. et al., 1995- Vasil'ev B., J. et al., 1995- Szczepaniak Z. et al., 1996- Holmes JH, 1996- Steele AD et al., 1996- Markowska-Daniel J. et al., 1996- Espinoza F. et al., 1997- Ada M. s sod., 1997- Wu H. et al., 1998).

V skladu s standardnimi pogoji elektroforeza lokacije segmentov genoma dovolj stabilna in omogoča identifikacijo izolat, ki temelji na identitete foregrammy. Opozoriti je treba, da je porazdelitev genomskih segmentov na foregramme genetsko odporne lastnost in vse spremembe v aminokislinski sekvenci genoma ima za posledico spreminjanje hitrosti migracije virusnih proteinov (Kuzuya M. s sod., 1996). Poleg tega se lahko narava foregrammy prirojenega posebnega izolat služijo kot orodje za dešifriranja rakete opredeliti načine in vire onesnaženja (Oishi J. et al., 1993- Broor S. et al., 1993- Beque R. et al., 1992). Poleg tega je ta metoda dovoljena rotavirusov razdeljena v dve podskupini s tako imenovano "kratko" ali "dolgo" pho-retipami (zaradi večje ali manjše mobilnosti 10 in 11 genomskih odsekov), ki je bistvenega pomena za razvrščanje RV prebivalstva. Zato lahko EF PAGE se uspešno uporabljajo v diagnostiki, epidemiologijo in razvrščanje glede na različne metode (RAL, GA, izolacije virusa v celični kulturi) - -method referenco.

Raziskave, ki jih izvaja več raziskovalnih skupin opravili so pokazale, da ima EF STRAN visoko občutljivost in specifičnost. Primerjalna študija teh parametrov v razmerju do FE PAGE, TEM in RLA izvedli z 103 otroki pregledom je pokazala, da je občutljivost 90, 84 in 80% in specifičnost 100, 100 in 81% (Hendricks M. K. et al., 1995 ). Analogni podatki, ki vključujejo dodajanje teh metod tudi PCR in IFA Dobimo Husain Buesa J.M. Vendar občutljivost FE PAGE, po teh avtorjev je nekoliko slabše rezultate PCR in ELISA, ki pa specifičnost je 100% (Husain et M. al., 1995- Buesa J. et al., 1996). Podobne rezultate smo dobili pri raziskavah stika z blatom iz 50 bolnikov IKP metod TEM, ELISA in EF PAGE. Znaki pozitivnimi ugotovitvami EF stran na EIA in EMP znašal 28% proti 35%. Vendar je treba poudariti, da se v treh vzorcih, kjer rotavirusni odkritih v TEM niso v skladu z učinkom Faraday zabeleženega foregramma PAGE značilnost rotavirus (Vasil'yev B., J. et al., 1990). Starejši naše študije na material IKP 510 bolnikih z uporabo ELISA, TEM in EF strani nam je potrditi Rotavit-stopenjski etiologiji bolezni v 37 in 23% (Vasil'yev B., J. et al., 1995).

Maldonado A. s sod. (1998) v primerjalno študijo kopromaterialov otrocih, hospitaliziranih z drisko, metode EF PAGE in ELISA dokumentirana RV naravo bolezni pri 42,7 in 49,5% oz.

Opozoriti je treba, da je poleg horizontalne in vertikalne elektroforeza uporablja, kar je po mnenju nekaterih avtorjev primerljiva z vodoravno specifičnosti in občutljivosti, ampak bolj preprosta. Ko ga držite, da postanejo avtorji predlagajo, da vključuje rezultate bromid-diy neposredno z gelom in uporabljati isto gel za več študij. Ti so bili oblikovani tudi z ultravijolično osvetlitve napravo, ki omogoča enostavno in udobno branje foregrammy (Zbindna R. et al., 1992).

Sprememba navpične elektroforezo z metodo vizualizacije foregramm srebrenje spremembe Giardano M. O. in ostali. (1997). Njihove ugotovitve so pokazale, da je novo spremembo občutljivosti, specifičnosti in cenejša od konvencionalne FE STRANI.

Tako je FE metoda STRAN trenutno pogosto uporablja v laboratorijih v različnih državah za RV diagnostiko. Številni primerjalni testi te metode s TEM, IEM, RAL in ELISA kažejo svojo visoko specifičnost in občutljivost, kot tudi možnost uporabe učinek Faradayevega efekta v STRANI kot referenčna metoda za učenje novih testnih sistemov. Uporaba Poliakrilamidni gel elektroforeza, da se ugotovi vire okužbe in načinov njenega širjenja, kot tudi dekodiranje izbruhi vzrokov je bila osnova za uspešno reševanje dejanskih problemov molekularno epidemiologijo.

prenosa Postopek proteini (Western-blot) ali nukleinske kisline (dot-blot ali Northern-blot in Južna blot) z elektroforetsko matrike in njihova premike na fazo površini trdnega imenujemo blot in nastalo prstnih odtisov - blot. Pri analizi blotogramm pomočjo imunskega sera tehniko, imenovano imunoblot.

Kot sonde navadno uporabljajo bodisi RNA prepisano vitro na matrici virusnega genoma, ali komplementarno DNA klonov, dobljenih na matrici virusnega genoma z uporabo reverzne transkriptaze in kasnejše molekulsko kloniranje. Starejše sonde označene z izotopi opravi 125j ali je32P, vendar v zadnjih letih je v uporabi tudi radioaktivne oznake - biotin, ali encimov, ki bistveno poenostavlja postopek, saj odpravlja vprašanja izotopa varnost (alkalna fosfataza, peroksidazo, itd.). V tem primeru se rezultati reakcijski zapiše v obliki barvnih lis oblikovanih pod vplivom encima do substrata dodamo, kar kaže, da sonda hibridizirana virusu RNA v materialu.