Virološki študije. Črevesnih bolezni. (Del 3)

Vse od prvih sklopov so temeljile na "sendvič" načela, kasneje uporabili "tandem" -version. V procesu gradnje nizov na različne izboljšave na obeh izkaza EIA in obdelavo vzorcev in se uporabljajo pufrske sisteme. Na primer, nekateri avtorji priporočajo uporabo EDTA za odstranjevanje zunanjega kapsidni lupino, ki razkriva filter kapsidnega antigenov notranji. Drugi so predlagali obdelovanje vzorcev Eagle MEM z 0,5% laktalbumin hidrolizat in antibiotiki omogoča uporabo te ekstrakt za odkrivanje virusa v tkivnih kulturah in TEM, zaradi česar je mogoče uporabiti enega in istega vzorca pri različnih metodah študije. Zelo pomembno pufer za vmesno izpiranje. Večina teh odbojnikov vsebuje solno raztopino z nizko koncentracijo detergenta, Tween 20 (Bryden A. S., 1990). Vsi kompleti vključujejo pozitivne in negativne kontrole. Kot negativno kontrolo se lahko uporablja kot pufri in posebno negativnem serumu. Kot pozitivno kontrolo preskusiti pozitivni serumi, ki se uporablja. Kljub temu je treba opozoriti, da je interpretacija rezultatov razlikuje od testa do testa. Primarno merilo kompleta je najmanj reaktiven ali "cut-off», ki se običajno uporablja za določanje pozitiven rezultat in razliko v ravni med negativno kontrolo in pozitivno raven, kar je idealno, optična gostota (OD) negativne kontrole mora biti <0,1. Однако на практике этот показатель колеблется у различных тестов. Что касается положительного результата, то он может быть достоверен в подавляющем большинстве случаев при показателях ОД > 0,5, т. е. в несколько раз превышает ОД негативного контроля. В то же время небольшая часть образцов слабо реагирует с ОД между «cut-off» и 0,5. Многие из них могут быть отрицательны в ПЭМ, но большая часть — положительна при ЭФ в ПААГ, ПЦР. Эти моменты необходимо принимать во внимание при проведении и учете ИФА.

Zaradi velikega števila komercialnih testnih sistemov je bila cela vrsta del, namenjenih za določitev njihove relativne učinkovitosti.

Opozoriti je treba, da so prvi komercialni sistemi za testiranje daleč od odlično občutljivost in specifičnost indeksov. Torej, Gibchrist M. s sod. (1987) za material iz bilo 136 bolnikov prepoznani te številke za 4 test ELISA sistemov: rotavirusom EIA, Pathfinder, rotavirusom Bioenzabead in Rotenzyme II, ki 91%, 98%, 80%, 84% in 100%, 78%, 95 %, 88 / A, v tem zaporedju. Pokazala nizko specifičnost preskusnih sistemov in Pathfinder Rotazyme II, slednji je dal lažno pozitivne rezultate, in po drugih avtorjev.

Za izboljšanje specifičnosti testnih sistemov, raziskovalci začeli uporabljati monoklonska protitelesa. Teste poliklonska in monoklonska protitelesa so pokazale prednost slednji. Avtorji skupine določi učinkovitost dveh kazalnikov Diagnostični preskusni sistemi na osnovi monoklonskih protiteles (Rotaclone, Pathfinder), in sistemov, ki temeljijo na treh poliklonskih protiteles (rotavirusom EIA, Rotazyme II Wellcozyme rotavirusom Dennehy P. et al., 1998). V študiji vzorcev blata iz 100 bolnikov z gastroenteritisom testiran na EF PAGE, se je pokazalo, da oba preskusni sistemi na osnovi monoklonskih protiteles razlikovala maksimalno (100%) občutljivost. Občutljivost poliklonskega testnih sistemih več kot 90% z nihanjem specifičnostjo v območju od 55 do 100% (Dennehy R. et al., 1988).

Flewett T. et al. (1989) o materialih iz 1163 otrok (v vol. H. 66 dojenčki) v primerjavi diagnostična učinkovitost testnega sistema Dakopatts podjetij in standard WHO preizkus sistemov. Občutljivost in specifičnost so Dakopatts enaka 97% v primerjavi s preskusnim sistemom WHO. Poleg tega so v študiji materialov iz teh poskusnih novorojenčkih testnih sistemov 100% in 98% oz.

Primerjalna ocena drugi test ELISA sistemov: Rotascreen, Wellcozyme, Rotazyme II in IDEIA pokazala, da le Rotascreen in IDEIA specifičnost in občutljivost večja od 90% (Molyneaux R.J. et al ,. 1989).

V zvezi s podatki o specifičnosti ELISA zamika od njegovih poskusov, da bi izboljšali občutljivost metode so bila, da se je izboljšala teh parametrov. Primerjalna študija občutljivosti, specifičnosti in naključje pozitivnih in negativnih rezultatih komercialnih kompletov Vidas rotavirus, Rotaclone Pathfinder in pod nadzorom PEM v študiji 464 kopromaterialov pokazala odlične rezultate: Vidas rotavirus 98- 99,3, 98,7 in 99% - Rotaclone - 100 - 98 99-in 100-Pathfinder - 100- 92,4- 87,3 in 100% (Dennehy R. N. et al, 1994). Kot je razvidno iz zgornjih podatkov, komercialni kompleti za testiranje kakovostni parametri so postale tako visoke, da se je število raziskovalcev (kot se nam zdi malo prezgodaj) predlagala, da se uporabljajo kot referenčni standard ELISA kit Rotaclone, Cambridge Biosci. Corp. (Dennehy P. H. et al., 1990). Vendar pa ni več previden pogled avtorjev, za absolutno točnih podatkov, skupaj z IFA in uporabo drugih načinov preiskave. TEM, PCR, EF PAGE (Donneli G. et al, 1993- Husain M. et al, 1995- Markowsca-. Daniel J. et al., 1996- Buesa G. et al., 1996- Dennehy PH et al., 1994- Jiang B. s sod., 1995). Kljub napredku pri razvoju sistemov za test ELISA, jih izboljšati raziskave je v teku. Torej, Ribas-Antunez M. s sod. (1998) so izvedli primerjalno ovrednotenje ELISA mestu in EF strani v raziskavi 100 kopromaterialov vzorcev. Avtorji visoke občutljivosti, specifičnosti in dogovorom o rezultatih teh metod je bila dokazana.

Skupaj z uporabo komercialne testnih sistemov uspešnih poskusih se razvije laboratorij ELISA kompletov iz več avtorjev (Ruggeri F. et al., 1992- Husain M. s sod., 1995- Buesa J. et al., 1996). Copyright laboratorijski testi na osnovnih parametrov niso slabša od komercialnih testnih sistemov. Tako je bil sklop zasnoval indijski Nacionalnega inštituta za virologijo (Pune) za diagnoza rotavirusi (NIV), ki smo primerjali s komercialnim nizom Dakopatts (Kelkar S. D., 1993). V procesu pregledu pojavil 63 vzporednih vzorcev, ki NIV pokazala 36 okužene osebe (57%), Dakopatts - 33 (52%) pri 100% specifičnostjo. Vendar pa so bili stroški laboratorijskega zdravila bistveno nižje kot pri drugih komercialnih kompletov, ki so dovoljene avtorji predlagajo uporabo NIV v državah v razvoju.

V naši državi je začela tudi proizvodnja domačih poslovnih testnih kompletov za IFA: »Rotapast" (St. Petersburg), "antigen Rota" (Nižni Novgorod), "Roth-analiza" (Ekaterinburg). Občutljivost in specifičnost teh sklopov, žal, daje podobno zmogljivost in tujih agentov, je 75%, s naključje pozitivnih rezultatov - 90%, negativnih rezultatov - 86% (Karpovitch A. G. et al., 1991). Hkrati je v številnih laboratorijih razvili in preizkusili svoje test ELISA sisteme za diagnozo rotavirus: Bukrin AG, Vasiliev 1988- BJ et al, 1989- Ramishvili Lee L., et al., 1991. - Dzyublik IV et al, 1990 Nosatenko AI et al, 1991) ...

Tako visoka občutljivost in specifičnost, hitrost in sposobnost do rezultatov raziskav računovodstva samodejno zagotoviti ELISA prednost med drugim laboratorijskih diagnostičnih metod rotavirusi. Opozoriti je treba, da je IFA ne uporabljajo le za ugotavljanje antigena, ampak tudi za tipizacijo virusa odkritjih. Takšno široko paleto možnosti metode omogoča, da je nujno v vsakem laboratoriju.

Sedimentne vsi diagnostični testi vključujejo reakcijo, ki temelji na aglutinacije delcev (eritrociti, lateksa, bakterije) senzibiliziranih z antigeni in protitelesa, ki so sposobni, da združi v prisotnosti seruma ali homolognih antigenov. Delci služijo kot nosilci specifičnih dejavnikov, agregacijo, ki nastane kot posledica antigen-protitelo reakcije, ki vizualno zabeležena prisotnost in narava usedline tvorjen. Zato lahko uporaba preskusa sedimenta zazna kot antigeni in protitelesa.

Presnova hemaglutinacije (RHA) temelji na sposobnosti človeških rdečih krvnih celic, različne vrste živali in ptic aglutinira humanega rotavirusa in živali. Ta reakcija se uporablja v začetnih fazah študije in diagnozo rotavirusi (Drozdov., Et al., 1982). Novejše študije so pokazale, da niso vsi sevi rotavirusi lahko aglutinira eritrocitov (Ezeqiel M. et al., 1995). V zvezi s tem je diagnostična vrednost te metode je vprašljiva in je trenutno RGA se skoraj nikoli ne uporablja. Hkrati pa obstajajo poročila o uporabi hemaglutinacije reakcije v raziskovalnem narave raziskav v zvezi z določitvijo sposobnosti človeških in živalskih rotavirusov aglutinira eritrocitov različnih skupin, kot tudi študijskih pogojev, pod katerimi obstaja hemaglutinacijo (Devitt SM, 1993). Nedavne dela, namenjeni določenega gena proteinov, odgovornih za hemaglutinacije in aminokislinske sekvence, ki kodira za to sposobnost. Kot rezultat, je uspelo vzpostaviti hemaglutinacije domeno, ki se nahaja med 93 in 203 AA VP4 (Crawford S. et al., 1994- Ezeqiel M. et al., 1995).

Reakcija posrednega ali pasivne hemaglutinacije (PHA ali RIGA) zelo pogosto uporabljajo v laboratorijske prakse (predvsem v majhnem laboratoriju), če je to potrebno, raziskati veliko število primerov in hitre rezultate (Kravchenko T. M. et al., 1991 Zarubinsky VY , pokrov S. A., 1989- Zakirova S. F. et al., 1990 Vasil'ev J. et al., 1987- 1989- Kirin VN et al., 1991, in A. W. Abenova et al., 1991).

Za razliko od RSA, RIGA uporabljajo v eritrocitih, občutljivi rotavirusni antigen. Tradicionalna objekt za preobčutljivost so človeške rdeče krvne celice, ovce in perutnina - kokoši, purani, race. Pripravimo iz priprav eritrocitne ptice naselijo hitreje, s čimer se zmanjša Časovna analiza brez izgube občutljivosti reakcij. Postopek pritrditve protiteles na eritrocite izvedemo z različnimi reagenti, med katerimi so najpogostejše amidol in VDV (bidiazotirovanny benzidin). Še več, uporaba imunoglobulinov v senzibilizaciji eritrocitov izboljšano učinkovitost diagnostičnega zdravila (Chubov N. B. et al., 1991). V naših raziskavah, RIGA izvaja eritrocitov diagnosticum s tehniko razvil v Sverdlovsk Nieve.

Rezultati Določevanje rotavirusa pri kopromaterialah pokazala, da je občutljivost RIGA 72% v primerjavi z 86% v ELISA in sovpadanje rezultatov pod nadzorom TEM in IEM je 100% (Vasil'yev B., J. et al., 1989). RIGA primerja rezultate s TEM, in RSK VIEF dalo večjo občutljivost Riga (Tamendarova N. C. et al., 1989). Podobne podatke o materialih in od 866 otrok prejelo vlogo RIGA, TEM in IEM (Zarubinsky VY, cap S. A., 1989). Ugotovljeno je bilo, da je občutljivost ekvivalent RIGA TEM in sovpadanje teh metod je znašal 96,6%. Primerljive rezultate pozneje Abenova W. A., et al Dobimo. (1961). Preizkus 1458 kopromaterialov hospitalizacije otroka z okužbo RV Riga, DGC, in TEM pokazala VIEF RV antigen 35,8- 26,2- 18,2 in 39,8% vzorcev, v tem zaporedju. Zato, RIGA še naprej uporablja v laboratorijski diagnostiki, vendar se zaradi pomanjkanja skladiščnih-stabilen pripravah poslovna eritrocitov otežuje široko uporabljajo za odkrivanje antigenov rotavirusi pri bolnikih materialov. Skupaj z direktno PHA v laboratoriju z uporabo metode reverzne TPHA se uporablja za določanje RV v celični kulturi in kopromaterialah trenutno (Tokieda M. s sod., 1996- Kuzuya M. s sod., 1998).